为什么生物制品要做强制降解试验??怎么做(3)
选择强制降解研究的合适条件
所有分子都可以通过某种化学或物理手段进行降解。下图显示了已知的常见强制降解条件示范,这些条件可诱导生物制品进行不同的降解途径。
强制降解所用的条件必须比加速稳定性研究中所用的条件更为苛刻。如果条件不变,建议延长暴露时间,而不要使用更极端的温度。选择相关的降解条件时,必须考虑以下几点:
是否涵盖了所有降解途径?
使用了几个取样时间点?
使用了多少额外的样品(用于新方法和表征)?
应该测量所有样品的总蛋白质含量(如下图所示),以评估不溶性聚集体的存在。由于确定的总蛋白质含量在一定条件下恒定,因此在这些条件下不会形成不溶性聚集体。但是,高温和长时间的条件会导致大量的高分子量蛋白质(HMWP)。必须将参考样品放在强迫降解样品旁边,以评估观察到的降解效应产生的原因。需要将来自特定研究的所有样品按同一分析系列进行分析,以排除可能的分析变异所造成的影响。
(A)在升高的温度(5°C,25°C和37°C)下保存1周和2周后确定的高分子量蛋白(HMWP)和(B)总蛋白含量。高效液相色谱的色谱图(C)说明了高温下HMWP峰的增加。
在开发阶段中开始强制降解试验
强制降解可以根据研究目的和可用样品的数量,在早期开发或后期开发中进行强制降解研究。卫生部门希望最晚在开发阶段的III期临床阶段进行强制降解研究,但是对于何时进行强制降解研究没有指导或具体要求。
强制降解研究将提供有关分子降解途径的知识。通过在开发初期进行此类研究,有关分子的知识将可用于最佳工艺和配方的开发。通过证明当前方法是否足以评估稳定性(例如,使用氧化样品开发用于确定氧化形式的方法)并确定哪些测试参数是最佳的指示指标,降解的样品可以帮助开发指示稳定性的分析方法。经过降解的样品在分析验证中也很有用,因为它们可以掺入验证实验中。但是,在开发的早期阶段通常只能提供有限的样品材料,并且分析软件包可能不完整。在开发过程中,工艺步骤和配方也可能会改变。此外,由于分析条件的进一步优化,分析方法可能会发生变化。因此,最有可能需要在开发的后期阶段重复或扩展强制降解研究。总之,应在开发过程中尽早进行强制降解研究,并在第三阶段进行更全面的强制降解研究。
强制降解研究的评估
综上所述,强制降解研究的结果应以图形方式显示,并应该包括色谱方法的比较图。结果矩阵图是显示结果的绝佳方法,因为这样的矩阵将能够指示哪些强制降解条件导致了哪个降解途径发生了哪些变化。应尽可能使用统计和动力学工具评估数据,以帮助理解降解动力学。强制降解研究揭示了生物制品最重要的降解途径,例如,此类途径可以指示聚集或可能引起关注的特定杂质的形成。强制降解研究还指出了最关注哪种分析方法,以及这些方法是否能够检测到发生的变化。
参考文献:
1. ICH, Q6A, Specifications: New Chemical Drug Substances and Products, Step 4 version (1999).
2. ICH, Q6B, Specifications Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/Biological Products, Step 4 version (1999).
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5. EMEA, Guideline On Stability Testing: Stability Testing of Existing Active Substances and Related Finished Products (London, October 2003).
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文章来源:《中国生物制品学杂志》 网址: http://www.zgswzpxzz.cn/zonghexinwen/2020/1106/344.html